logo

E. coli gram plet

Mikroorganismer (fra latin. Mikro - små) - organismer, der er usynlige for det blotte øje. Disse omfatter protozoer, spirocheter, svampe, bakterier, vira, hvis undersøgelse er involveret i mikrobiologi. Størrelsen af ​​mikroorganismer måles i mikrometer (μm). I microworld er der en bred vifte af former, som er opdelt i grupper i overensstemmelse med de generelle principper for biologisk klassificering.

Den første generelle biologiske klassifikation blev skabt i det XVIII århundrede, systemet for den svenske forsker C. Linnaeus, baseret på morfologiske tegn og herunder dyrenes og plantens verden. Med udviklingen af ​​videnskab i klassifikationen begyndte at tage ikke kun hensyn til morfologiske, men også fysiologiske, biokemiske og genetiske træk ved mikroorganismer. På nuværende tidspunkt er det umuligt at tale om en samlet klassificering af alle levende organismer: samtidig med at ensartede principper holdes, har klassifikationerne af makro- og mikroorganismer deres egen karakteristika.

De vigtigste trin i alle klassifikationer er: kongeriget - division - klasse (gruppe) - ordre - familie - køn - arter. Hovedklassifikationskategorien er arten - et sæt af organismer af fælles oprindelse, lignende morfologiske og fysiologiske tegn og metabolisme.

Mikroorganismer tilhører kongeriget prokaryoter, hvis repræsentanter, i modsætning til eukaryoter, ikke besidder en dekoreret kerne. Arvelig information i prokaryoter er indesluttet i et DNA molekyle placeret i cytoplasmaet i cellen.

For mikroorganismer blev en samlet international klassifikation vedtaget i 1980, som er baseret på det system, som den amerikanske forsker Bergi foreslog.

For at bestemme hvilke arter en mikroorganisme tilhører, er det nødvendigt at studere dets egenskaber (celleform, sporulation, motilitet, enzymatiske egenskaber) ved hjælp af forskellige metoder og ved hjælp af determinant finde sin systematiske position - identificere.

Inden for arten er der muligheder: morfovarianter er forskellige i morfologi, biovarianter - i biologiske egenskaber, kemovarianter - i enzymatisk aktivitet, serovarianter - i antigenstruktur, fagvarianter - i følsomhed overfor fager.

Til betegnelsen af ​​mikroorganismer blev en generel biologisk eller binomial (dobbelt) nomenklatur indført af C. Linney vedtaget. Fornavnet angiver en slags og er skrevet med et stort bogstav. Det andet navn angiver typen og er skrevet med et lille bogstav. For eksempel Staphylococcus aureus - Staphylococcus aureus. Navne kan afspejle navne på forskere, der opdagede mikroorganismer: brucella - til ære for Bruce, Escherichia - til ære for Escherich osv. Navne på organer, der påvirker mikroorganismen, er inkluderet: pneumokokker - lunger, meningokokker - hjernemembran mv..

bakterier

Bakterier er encellulære organismer uden chlorophyll. Den gennemsnitlige størrelse af en bakteriel celle er 2-6 mikron. Størrelsen og formen af ​​bakterieceller, der er forbundet med mikroorganismer af en bestemt type, kan variere under påvirkning af forskellige faktorer (afhængigt af bakteriekulturens alder, habitat osv.). Dette fænomen kaldes polymorfisme.

Ifølge cellens form er bakterierne opdelt i tre grupper: sfærisk, stangformet og konvolut (figur 4).

Sfæriske bakterier kaldes cocci (fra latin. Coccus - bær) og har en cellediameter på 0,5 til 1 mikron. Formen af ​​cocci er forskellig: sfærisk, lancetformet, bønneformet. Ifølge cellernes fælles opdeling adskiller de sig fra cocci: mikrokasser (fra latin. Mikro - små) - cellerne opdeles i forskellige planer og er placeret separat; diplococci (fra latin. diploos - dobbelt) - cellerne er opdelt i et plan og derefter arrangeret i par; disse omfatter lanceolate pneumokokker og bønne gonokokker og meningokokker; Streptokokker (fra lat. Streptos-kæde) - celler opdeles i et plan og afviger ikke og danner en kæde; Staphylococcus (fra latin. Staphyle - bunke) - celler opdeles i forskellige planer, der danner klynger i form af en flok druer; tetracocci (fra lat. tetra - fire) - cellerne er opdelt i to indbyrdes vinkelrette planer og arrangeret i fire; Sarcins (fra Lat. Sarcio - connect) - cellerne er opdelt i tre gensidigt vinkelrette planer og arrangeret i form af baller eller pakker med 8 eller 16 celler i hver.

Cocci er bredt fordelt i det ydre miljø såvel som hos mennesker og dyr. Næsten alle grupper af cocci, undtagen mikrokasser, tetracocci og sarkiner, omfatter forårsagende midler til infektionssygdomme.

Stangformede former kaldes bakterier. Deres gennemsnitlige størrelser er fra 1 til 6 mikrometer i længde og fra 0,5 til 2 mikrometer i tykkelse.

Bakterier adskiller sig i udseende: deres ender kan afrundes (E. coli), hugget af (miltbrandpatogen), spidsen (forårsagende agenspest) eller fortykket (difteripatogen). Efter opdeling kan bakterierne arrangeres parvis - diplobacter (Klebsiella), en kæde (miltbrandpatogen), nogle gange i vinkel til hinanden eller tværs (difteripatogen). De fleste bakterier bosætter sig tilfældigt.

Blandt bakterierne er der buede former - vibrios (cholera) årsagsmidlet.

Spiraler og spirocheter tilhører sammenviklede former. Formen af ​​deres celler ligner en spiral. Mest spirillede neboleznetvorny.

Strukturen af ​​bakteriecellen

Sammen med et lysmikroskop anvendes elektronmikroskopiske og mikrokemiske undersøgelser til at studere bakteriecellens struktur for at bestemme bakteriecellens ultrastruktur.

En bakteriecelle (figur 5) består af følgende dele: en trelags membran, cytoplasma med forskellige indeslutninger og et nukleært stof (nukleoid). Yderligere strukturelle formationer er kapsler, sporer, flagella, drak.

Cellevæggen består af det ydre slimlag, cellevæggen og den cytoplasmatiske membran.

Det slimhinde kapsellag er placeret uden for cellen og udfører en beskyttende funktion.

Cellevæggen er en af ​​cellens vigtigste strukturelle elementer, bevarer sin form og adskiller cellen fra omgivelserne. En vigtig egenskab ved cellevæggen er selektiv permeabilitet, som sikrer penetration i cellen af ​​essentielle næringsstoffer (aminosyrer, kulhydrater osv.) Og udskillelsen af ​​metaboliske produkter fra cellen. Cellevæggen opretholder et konstant osmotisk tryk inde i cellen. Vægets styrke giver murein, et stof af polysaccharid natur. Nogle stoffer ødelægger cellevæggen, såsom lysozym.

Bakterier fuldstændig blottet for cellevæggen hedder protoplaster. De bevarer evnen til at indånde, opdele, syntetisere enzymer; til eksterne faktorer: mekanisk skade, osmotisk tryk, beluftning osv. Protoplaster kan kun gemmes i hypertoniske opløsninger.

Bakterier med en delvis ødelagt cellevæg kaldes sfæroplast. Hvis du undertrykker processen med cellevægssyntese under anvendelse af penicillin, dannes L-former, som i alle bakteriearter er sfæriske store og små celler med vakuoler.

Den cytoplasmatiske membran passer godt til cellevæggen indefra. Det er meget tyndt (8-10 nm) og består af proteiner og phospholipider. Det er et grænse semipermeabelt lag, hvorigennem cellen er drevet. Membranen indeholder permease enzymer, der udfører aktive substansoverførings- og respirationsenzymer. Den cytoplasmatiske membran danner mesosomer involveret i celledeling. Når en celle placeres i en hypertonisk opløsning, kan membranen adskille sig fra cellevæggen.

Cytoplasma - det indre indhold af bakteriecellen. Det er et kolloidalt system bestående af vand, proteiner, kulhydrater, lipider, forskellige mineralsalte. Den kemiske sammensætning og konsistens af cytoplasma varierer med cellens alder og miljømæssige forhold. Cytoplasma indeholder nukleart materiale, ribosomer og forskellige indeslutninger.

Nucleoid, det nukleare stof i cellen, dets arvelige apparat. Den nukleare substans af prokaryoter har i modsætning til eukaryoter ikke sin egen membran. Nukleotiden af ​​en moden celle er en dobbeltstreng af DNA, der er viklet ind i en ring. Celleens genetiske information er kodet i DNA-molekylet. Ifølge genetisk terminologi kaldes et nukleært stof et gen eller genom.

Ribosomer er placeret i cytoplasmaet i cellen og udfører funktionen af ​​proteinsyntese. Sammensætningen af ​​ribosomet omfatter 60% RNA og 40% protein. Antallet af ribosomer i cellen når 10.000. Når de tilsammen dannes, danner ribosomerne polysomer.

Inklusioner - granuler indeholdende forskellige ekstra næringsstoffer: stivelse, glykogen, fedt, volutin. De er placeret i cytoplasmaet.

Cellerne fra bakterier i vitalitetsaktiviteten danner beskyttende organeller - kapsler og sporer.

Kapslen er et ydre komprimeret slimlag ved siden af ​​cellevæggen. Dette er et beskyttende organ, der forekommer i nogle bakterier, når de kommer ind i kroppen af ​​mennesker og dyr. Kapslen beskytter mikroorganismen mod kroppens beskyttelsesfaktorer (patogener af lungebetændelse og miltbrand). Nogle mikroorganismer har en permanent kapsel (Klebsiella).

Sporer findes kun i stangformede bakterier. De dannes, når mikroorganismen kommer i ugunstige miljøforhold (høje temperaturer, tørring, ændring af pH, reducering af mængden af ​​næringsstoffer i miljøet osv.). Sporerne er placeret inde i bakteriecellen og repræsenterer et komprimeret område af cytoplasmaet med en nukleoid, klædt med sin egen tætte membran. I kemisk sammensætning adskiller de sig fra vegetative celler i en lille mængde vand, et forøget indhold af lipider og calciumsalte, som bidrager til spores høje stabilitet. Sporulering sker inden for 18-20 timer; når mikroorganismen træder ind under de gunstige betingelser i sporet inden for 4-5 timer, spirer det til en vegetativ form. I en bakteriecelle dannes kun en spore, derfor er sporer ikke reproduktive organer, men tjener til at udholde negative forhold.

Spordannende aerobiske bakterier kaldes baciller, og anaerobe bakterier kaldes clostridier.

Sporer er forskellige i form, størrelse og placering i cellen. De kan placeres centralt, subterminalt og terminalt (figur 6). Anthraxpatogenet ligger centralt, dets størrelse overstiger ikke diameteren af ​​cellen. Botulismepatogenets spor er placeret tættere på enden af ​​cellen - subterminal og overstiger cellens bredde. I tilfælde af stivkrampepatogenet er en afrundet spore placeret ved enden af ​​cellen - terminalt og væsentligt overstiger cellens bredde.

Flagella er bevægelsesorganer, der er karakteristiske for stangformede bakterier. Disse er tynde trådfibriller bestående af et protein, flagellin. Deres længde overstiger signifikant længden af ​​bakteriecellen. Flagella afviger fra basallegemet, der befinder sig i cytoplasmaet, og går til overfladen af ​​cellen. Deres tilstedeværelse kan detekteres ved at bestemme mobiliteten af ​​celler under et mikroskop, i et halvflydende næringsmedium eller ved farvning med særlige metoder. Flagellas ultrastruktur er studeret i elektronmikroskopet. Ifølge flagellas placering er bakterierne opdelt i grupper (se figur 6): monotrichs med en flagella (kolas forårsagende middel); amphitrikhs - med bunker eller single flagella i begge ender af cellen (spirilla); lofotrichi - med et bundt flagella i den ene ende af cellen (fækalt alkali-dannende middel); peritrichas - flagella placeret i hele celleoverfladen (tarmbakterier). Bakteriernes hastighed afhænger af antallet af og placering af flagella (monotrichs er mest aktive), i en bakteriealder og på indflydelse af miljøfaktorer.

Drikke eller fimbriae - villi placeret på overfladen af ​​bakterieceller. De er kortere og tyndere end flagella og har også en spiralstruktur. Består af at drikke protein - pilin. Nogle drak (nogle få hundrede) tjener til at binde bakterier til dyr og mennesker, mens andre (single ones) involverer overførsel af genetisk materiale fra en celle til en celle.

mycoplasma

Mycoplasmer er celler, der ikke har en cellevæg, men er omgivet af en cytoplasmisk membran med tre lag lipoprotein. Mycoplasmaer kan være sfæriske, ovale, i form af filamenter og stjerner. Mycoplasmer ifølge Bergs klassificering er opdelt i en separat gruppe. I øjeblikket modtager disse mikroorganismer stigende opmærksomhed som patogener af inflammatorisk natur. Deres størrelser varierer fra nogle få mikrometer til 125-150 nm. Små mycoplasmer passerer gennem bakteriefiltre og kaldes filtreringsformer.

spirokæter

Spirochetes (se fig. 52) (fra det latinske speirbøjning, chaitehår) - tynde, konvolutte, mobile encelle organismer, der strækker sig i størrelse fra 5 til 500 mikron i længden og 0,3-0,75 mikron i bredden. Med protozoer har de til fælles en bevægelsesmåde ved at reducere det indre aksiale filament bestående af et bundt af fibriller. Spirochets bevægelse er forskelligt: ​​translationelle, roterende, flexion, bølgende. Resten af ​​cellestrukturen er typisk for bakterier. Nogle spirocheter er let farvet med anilinfarvestoffer. Spirocheter er opdelt i fødsel i henhold til antal og form af trådkrøller og dens ende. Ud over de saprofytiske former, der er almindelige i naturen og i menneskekroppen, er der patogener blandt spirochaea, syfilis årsagsmidler og andre sygdomme.

Rickettsia

Rickettsia - mikroorganismer i størrelse fra 0,2 til 30 mikron. De har den sædvanlige cellestruktur af bakterier: dobbeltlag, cytoplasma, nukleoid. Formen af ​​rickettsia kan være stangformet, filiform og coccoid. Alle rickettsia er intracellulære parasitter, dvs. de kan kun udvikle sig i celler af en levende organisme. De forårsager smitsomme sygdomme som tyfus og forskellige feber. Bærerne af rickettsiae er leddyr: flåter, lus og lopper, i hvis krop rickettsiae former sig.

virus

Virus (se fig. 53) er de mindste ikke-cellulære organismer. Viruspartiklen hedder virion. Dimensioner af virioner varierer fra 15 til 400 nm. De fleste vira kan kun ses med et elektronmikroskop. Skalet af virionen, kapsiden, består af proteinmolekyler. Inde er en enkelt type nukleinsyre - DNA eller RNA. Efter type nukleinsyre vira er opdelt i to grupper - DNA og RNA vira. Alle vira er obligatoriske (obligatoriske) parasitter og i laboratorier dyrkes i kyllingembryoner, dyr eller vævskultur. Formen af ​​virioner er forskellig: sfærisk, stangformet, kuboid og spermatozon. Reproduktion af vira udføres ved separat syntese af skallen og nukleinsyren i værtscellen efterfulgt af samling af virionerne. Denne proces kaldes reproduktion. I værtsorganismen danner nogle vira intracellulære indeslutninger og elementære legemer, som er synlige i et konventionelt lysmikroskop, da deres værdier er adskillige mikrometer. Disse formationer har diagnostisk værdi. Virus forårsager sygdomme hos bakterier, planter, dyr. De vigtigste menneskelige infektionssygdomme af viral art er influenza, mæslinger, polio, hepatitis og rabies.

Blandt vira isoleres en gruppe fag (fra Lat. Phagos - fortærende), hvilket forårsager lysering (destruktion) af mikrobielle celler. Mens de indre egenskaber og sammensætningen af ​​vira bevares, varierer fagerne i virionens struktur (se kapitel 8). De forårsager ikke menneskers og dyrsygdomme.

Test spørgsmål

1. Fortæl os om klassificeringen af ​​mikroorganismer.

2. Hvad er de vigtigste egenskaber for repræsentanter for kongeriget prokaryoter.

3. Beskriv og beskriv de vigtigste former for bakterier.

4. Navngiv cellens hovedorganeller og deres formål.

5. Giv en kort beskrivelse af hovedgrupper af bakterier og vira.

Undersøgelse af mikroorganismernes morfologi

At studere mikrofonernes morfologi anvendte mikroskopisk metode til forskning. En vigtig forudsætning for en vellykket anvendelse af denne metode er korrekt forberedelse af et smear fra materialet under studiet eller bakteriekulturen. Kultur refererer til mikroorganismer dyrket på næringsmedier i laboratoriet.

Teknik til smearforberedelse

Til arbejde er det nødvendigt at have rent og affedtet dias og dækglas. Nye briller koges i 15-20 minutter i en 2-5% sodavand eller sæbevand, skylles med vand og placeres i svag saltsyre, og skylles grundigt med vand.

Briller, der er blevet brugt og forurenet med farvestoffer eller nedsænkningsolie, kan behandles på to måder: 1) nedsænk i 2 timer i koncentreret svovlsyre eller kromblanding, og skyll derefter grundigt 2) kog i 30-40 minutter i en 5% opløsning af sodavand eller alkali. Rå glas kan affedtes ved at gnide det med sæbe og derefter rense det med en tør klud.

Advarsel! Hvis glasset er godt affedtet, spredes der en dråbe vand på det jævnt uden at bryde op i små dråber.

Glas opbevares i skibe med jordstoppe i en blanding af Nikiforov (lige mængder alkohol og ether) eller i 96% alkohol. Fra glasopløsningerne fjernes med pincet.

Advarsel! Når du arbejder, holdes glas med fingrene til kanten.

Materialet til undersøgelsen påføres et glasskinne med en bakteriel loop, nål eller Pasteur pipette. Den mest anvendte bakterieløkke (figur 7), lavet af platin eller nichrom filament 5-6 cm lang. Sløjfen er fastgjort i en løber eller forseglet i en glasstang. Enden af ​​ledningen er bøjet i form af en ring med en størrelse på 1 × 1,5 eller 2 × 3 μm.

Advarsel! Korrekt forberedt sløjfe, når den nedsænkes i vand og ekstraheres derfra, bevarer vandfilmen.

Før smøring udbrændes den arbejdende del af sløjfen i brænderens flamme i lodret stilling: først løkken selv og derefter metalstangen. Denne manipulation udføres efter afslutningen af ​​såningen.

Fremstilling af et smear fra en kultur dyrket på et flydende næringsmedium. Den glatte glideskinne brænder i brænderen og afkøles. Kultur er påført på en glasskinne placeret på en stativ (Petri skål, stativ). Kulturrøret holdes med tommelfingeren og pegefingeren på venstre hånd. Sløjfen holdes i højre hånd. Uden at løsne sløjfen, trykker fingerfingeren i højre hånd korken til håndfladen og fjern den forsigtigt fra røret. Bevægelsen skal være glat og rolig. Halsrørene brændte i brænderens flamme. Injicer en loop i røret. Cool løkken mod rørets væg og sænk den derefter i kulturen. Tag løkken ud uden at røre rørets vægge. Luk proppen, før den passerer gennem brænderens flamme. Sæt røret i et stativ. Sløjfen påføres på kulturen på en glasskinne og spredes jævnt i en cirkulær bevægelse. Derefter brændes løkken i brænderens flamme. En udtørring efterlader at tørre.

Advarsel! Smøret skal være jævnt malet, tyndt og småt (med en to-kopeck-mønt).

Fremstilling af et smear fra en kultur dyrket på et tæt næringsmedium. På en forberedt glasskinne anbringes en dråbe isotonisk natriumchloridopløsning (0,9%) med en Pasteur pipette eller sløjfe. Kulturen slibes forsigtigt af agar i et reagensglas eller petriskål og emulgeres i en dråbe på glasset. Den forberedte smøre bør være ensartet og ikke tyk. Når det tørrer, forbliver glasskinnen svag.

Fremstilling af smear fra pus eller sputum. Materialet tages med en steril pipette eller sløjfe og påføres på midten af ​​glideren. Den anden glasskærm dækker den første, så en tredjedel af det første og det andet glas forbliver frit. Glas med indsats, der skubber til siderne. Få to store slag.

Fremstilling af smear fra blod. En dråbe blod påføres på en glasskinne på en afstand af en tredjedel fra venstre kant. Derefter rører kanten af ​​specialmalet glas, vippe den i en vinkel på 45 °, en bloddråbe. Tryk på det polerede glas på motivet og skub det fremad. Et korrekt forberedt smør er gullig og gennemskinnelig.

Forberedelse af smears udskriver fra indre organer af lig og levnedsmidler med fast konsistens. Overfladen af ​​et organ eller fødevareprodukt brændes med en varm skalpel og et stykke materiale skæres ud fra dette område. Pincet håndter forsigtigt dette stykke, og overfladen af ​​skiven rører glideren på to til tre steder, hvilket gør en række udtværinger, udskrifter.

Smøre tørring

Smøret tørres i luft ved stuetemperatur. Om nødvendigt kan den tørres i nærheden af ​​brænderflammen og holde glasset i vandret position ved kanterne med tommelfingeren og pegefingeren og børste den op.

Advarsel! Ved høje temperaturer kan forstyrrelser i cellestrukturen forekomme.

Smørefiksering

Smøre er fastgjort efter fuldstændig tørring for at: 1) fikse mikroorganismerne på glasset; 2) neutralisere materialet 3) dræbte mikroorganismer oplever farve bedre. En fast vatpind kaldes et lægemiddel.

Måder at fastsætte. 1. Fysisk - brænderflammen: glas tage pincet eller tommelfinger og pegefinger og tre gange udføres gennem den øvre del af brænderflammen i 6 sekunder.

2. Kemisk - i væsken: cellulære elementer i udstrygningspræparater af blodudstrygninger og under påvirkning af høje temperaturer er ødelagt, så de behandles med en af ​​fastgørelses- væsker: a) methyl spirtom- 5 min; b) ethylalkohol - 10 min; c) en blanding af Nikiforov - 10-15 minutter; d) acetone - 5 minutter; e) dampe af syre og formalin - nogle få sekunder.

Farvepræparater

Efter fiksering fortsæt med farvning af stoffet.

Farvningsprodukter fremstillet på et specielt udstyret bord, dækket af linoleum, plastik, glas osv. På bordet har du brug for et fartøj med destilleret vand; stå af to rør eller pinde, forbundet med gummi rør på begge sider (til lægemidler); pincet, cylindre, pipetter, filterpapir, et sæt farvestoffer, kapacitet til at dræne dem. Maleriet bordet skal være placeret i nærheden af ​​vandhanen.

Forholdet mellem mikroorganismer og farvestoffer kaldes deres tinctorielle egenskaber. Anilinfarvestoffer anvendes meget i mikrobiologi. De fleste mikroorganismer opfatter bedre basiske farvestoffer.

Følgende farvestoffer anvendes mest: rødt (basisk magenta, sur magenta, congo rødt, neutralt rødt); blå (methylen og toluidin); violet (gentian, methyl, krystallinsk); brun-gul (Vesuvine, Chrysoidin); grøn (strålende, malakit).

Alle farvestoffer fremstilles i form af amorfe eller krystallinske pulvere. Af dem forbereder mættede alkohol- og phenolopløsninger og derefter til arbejde ved anvendelse af vandalkohol- eller vand-phenolopløsninger af farvestoffer. Hvis der anvendes under koncentreret farvestofopløsning, præpareres præparatet med filterpapir, hvorpå farvestof påføres. På samme tid forbliver farvestykkerne på papir.

Advarsel! En dråbe farvestof påføres med en pipette, så den dækker hele præparatet.

Farveopskrifter

1. Mættede alkoholopløsninger (indledende):

Blandingen anbringes i en termostat indtil den er fuldstændigt opløst i flere dage. Ryst dagligt. Opbevares i kolber med jordstoppe.

2. Carbol Magenta Zylya (til farvning af syrefaste mikroorganismer, sporer og kapsler):

Advarsel! Carbolsyre hældes i farvestoffet, og ikke omvendt.

Blandingen rystes kraftigt i flere minutter, filtreres og hældes i et hætteglas til opbevaring.

3. Fuchsin Pfeiffer (til farvning på grammet og for en enkel farvemetode):

Farvestoffet fremstilles umiddelbart inden brug.

4. Carbol gentian violet (for gram plet):

mættet alkoholopløsning

Gentian Violet - 10 ml

carbolsyre 5% - 100 ml

Opløsningerne blandes og filtreres gennem et papirfilter.

5. Lugolopløsning (til gramfarvning og reagensstivelse):

Blandingen anbringes i en flask af grundglas, forseglet og anbringes i en termostat i en dag, hvorefter der tilsættes 300 ml destilleret vand.

6. Alkal opløsning af methylenblåt Leffler:

7. Papirer på Sinev (til farve på gram):

Strimlerne af filterpapir imprægneres med en opløsning og tørres.

Farvestoffer er opdelt i indikativ (enkel) og differentiel (kompleks), der identificerer bakteriecellens kemiske og strukturelle egenskaber.

Enkel farvemetode

Lægemidlet er anbragt på stativ til maling, testmaterialet op. En farvestofopløsning påføres den med en pipette. Efter den angivne tid hældes farvestoffet omhyggeligt, præparatet vaskes med vand og tørres med filterpapir. Brug en enkelt farve med en enkel metode. Methylenblå og alkalisk blå Leffler male stoffet i 3-5 minutter, med Pfeiffer fuchsin 1-2 minutter (se figur 4).

En dråbe neddypningsolie påføres det farvede og tørrede produkt og mikroskopisk ved anvendelse af et nedsænkningssystem.

Komplicerede farveteknikker

Gram stain (universal metode). Den mest almindelige differentierede farvningsmetode er Gram stain.

Afhængig af resultaterne af farvning er alle mikroorganismer opdelt i to grupper - gram-positive og gram-negative.

Gram-positive bakterier cellevæg indeholder magnesiumsaltet af RNA, der danner et kompleks forbindelse med iod og et farvestof basisk (ensian, methyl eller krystalviolet). Dette kompleks er ikke ødelagt af alkoholens virkning, og bakterierne beholder deres lilla farve.

Gram-negative bakterier kan ikke beholde hovedfarvestoffet, da de ikke indeholder magnesiumsaltet af RNA. Under påvirkning af alkohol vaskes farvestoffet væk, cellerne bliver misfarvede og farves med et yderligere farvestof (fuchsin) i rødt.

1. På lægemidlet pålæg et stykke papir på den blå og sæt et par dråber vand eller en opløsning af gentian violet. Farve 1-2 minutter Afskal papiret eller kassér farvestoffet.

2. Uden vask med vand skal Lugol-opløsningen anvendes til sortning (1 min), hvorefter farvestoffet drænes.

3. Anvend ikke 96% alkohol til udtømning af farvestoffet (30-60 s) uden at vaske med vand. Du kan dyppe stoffet i et glas alkohol i 1-2 sekunder.

4. Vask præparatet med vand.

5. Mal over Pfeiffer's fuchsin i 3 minutter, vask med vand og tør.

Mikroskopisk ved anvendelse af et nedsænkningssystem.

Farve på Tsilu - Nielsen (til syrefastholdende bakterier). Denne metode anvendes til at identificere bakterier af tuberkulose og spedalskhed, der har en stor mængde lipider, voks og hydroxysyrer i cellemembranen. Bakterier er sure, alkali og alkohol resistente. For at forøge permeabiliteten af ​​cellevæggen udføres det første farvningstrin ved opvarmning.

1. Det faste præparat er dækket med filterpapir og Zulya fuchsin påføres. Ved at holde glasset med pincet, opvarmes lægemidlet over brænderflammen, indtil dampen udledes. Tilsæt en ny del af farvestoffet og opvarm en anden 2 gange. Efter afkøling skal du fjerne papiret og vaskes med vand.

2. Præparatet blev affarvet med 5% vandig svovlsyre, nedsænkning i opløsningen 2-3 gange eller hælde syre på glasset, derefter vasket med vand adskillige gange.

3. Vask med en vand-alkoholopløsning af methylenblåt i 3-5 minutter, vask med vand og tør.

Mikroskopisk ved anvendelse af et nedsænkningssystem.

Syrebestandige bakterier bliver røde og resten bliver blå (se figur 4).

Farve på Ozheshko (identifikation af en tvist). 1. Hæld et par dråber af en 0,5% opløsning af saltsyre på et lufttørret smør og opvarm det til dampform. Lægemidlet tørres og fastgøres over en flamme.

2. Malet ifølge Ziehl-Nielsen-metoden. Syrebestandige sporer er farvede rosa-røde, og bakteriecellen blå. (Se figur 4).

Farve ifølge Burri - Hins (identifikation af kapslen). Denne metode kaldes negativ, fordi baggrunden af ​​præparatet og bakteriecellen er farvet, og kapslen forbliver umalet.

1. På en glasskinne sættes en dråbe sort blæk fortyndet 10 gange. Det gør en dråbe kultur. Et glas smear bruges til at smøre, ligesom et blodsprøjt og tørres.

2. Fastgjort ved kemiske midler med alkohol eller sublim. Vask forsigtigt med vand.

3. Mal Pfeiffer Fuchsin 3-5 min. Vask forsigtigt og lufttørre.

Advarsel! Brug ikke filterpapir for at undgå beskadigelse af præparatet.

Mikroskopisk ved anvendelse af et nedsænkningssystem. Baggrunden af ​​præparatet er sort, cellerne er røde, kapslerne er umalet (se figur 4).

Livstidens farve af mikroorganismer

For at studere en levende kultur anvendes methylenblåt og andre farvestoffer oftest i store fortyndinger (1: 10.000). En dråbe af testmaterialet blandes på et glasglas med en dråbe farvestof og dækkes af et dækglas. Mikroskopisk ved hjælp af en 40 × linse.

Undersøgelse af mobiliteten af ​​mikroorganismer

Til forskning ved anvendelse af en kultur af bakterier dyrket i et flydende næringsmedium eller en suspension af bakterier i en isotonisk opløsning af natriumchlorid.

Den knuste dråbe metode. En dråbe kultur er pipetteret på et glasskinne og dækket af et dækglas. For at undgå dannelsen af ​​luftbobler leveres dækglaset med en kant til kanten af ​​dråben og sænker det kraftigt. For at beskytte lægemidlet mod tørring placeres det i et fugtigt kammer.

Vådkammeret er en petriskål, hvor bunden er et vådt filterpapir. To kampe sættes på papiret og forberedelsen er placeret på dem. Kopedæksel med låg.

Mikroskopisk forstør linsen 40x i et mørkt felt (se kapitel 2).

Metoden til hængende dråber (figur 8). Til fremstilling af lægemidlet kræver et glas med et hul, et dæksglas og petrolatum. Hulets kanter er dækket af et tyndt lag af vaselin.

På omslaget påføres glas en dråbe kultur. Derefter forsigtigt dække dækglaset med en brønd, så dråbet er i midten. Klæbende glas drejer hurtigt om glaspladen. Dråbet er i det hermetiske kammer og fortsætter i lang tid. Når mikroskopi først finder sted med en lille forstørrelse (8 ×), finder du kanten af ​​en dråbe og gennemfører derefter en undersøgelse af lægemidlet ved høj forstørrelse.

Test spørgsmål

1. Hvordan tilberedes en bakteriel løkke?

2. Hvad er målene og metoderne til fastsættelse af slagtilfælde?

3. Hvad er de vigtigste farvestoffer.

4. Hvilke metoder studerer mikroorganismernes mobilitet?

opgave

1. Tag færdige præparater, studer dem og tegne de grundlæggende former for mikroorganismer.

2. Forbered smør fra forskellige materialer (kultur, pus, blod, smears-prints).

3. Farvepræparater med komplekse metoder (Gram, Zill - Nielsen, Ozheshko, Burri - Hins).

E. coli gram plet

Fig. 1.26. Bestemmelse af toxigeniciteten af ​​difteri-corynebakterier i en ændret metode

I - stafylokokker 2 - streptokokker 3 - sardin 4 - gonokokker 5 - pneumokokker 6 - kapsel pneumokokker 7 - Corynebacterium diphtheria 8 - Clostridium 9 - bacillus 10 - Vibrio 11 - spirillae 12 - treponema 13 - borrelia 14 - Leptospira 15 - Actinomycetes 16 - placering flagella a - monotrichi, b - lofotrichi, in - amphitrihi, ikke mindre. [c.29]

RPG er meget udbredt i diagnosen af ​​sygdomme. forårsaget af vira, rickettsiae og exotoxinproducerende bakterier. Af stor praktisk betydning har den til bestemmelse af toksiciteten af ​​corynebacterium difteri. [C.68]

Mikroskopi. Materialet fra patienten er kun mikroskoperet efter lægens anmodning. Under disse omstændigheder er en udledning slimhindemembran eller film fjernet to tamponer en af ​​dem anvendes til udsæd, en anden - til fremstilling af slaget. S. Sirshivpaye besidder polymorfisme og accepterer ikke farvestoffer godt. Det er muligt at plette smør med methyl acetat violet, Leffler blå, toluidin blå. ifølge Neisser, ifølge Gram (se farveindgang, figur 4). Smears fremstillet ud fra en film, Corynebacterium diphtheria har form af enkelte stave med fortykkelser kølleformede, vinklet eller lignende figur V spredte fingre, er de mindre tilbøjelige til at danne en klynge-lignende filt eller spredte ben. Ved maling acetat, methyl violet eller blå Leffler klart identificeret intenst farvede [c.203]

Fig. 59. Bestemmelse af toksigeniciteten af ​​corynebacterium difteri i udfældningsreaktionen i agar.

Enderne af stængerne vil blive afskåret, så at sige (miltbrand bacillus), afrundet (E. coli), skarp (fuzobakterii) eller i form af fortykkelse, og derefter holde som en mace (Corynebacterium diphtheria). [C.30]

Let krumme pinde kaldes vibrios (cholera vibrio). De fleste af de stavformede bakterier er inkonsekvent, for i sidste ende af celledeling hinanden. Hvis slutningen af ​​celledeling forbliver bundet ikke-specialiserede cellevægsfragmenter og ikke afviger, de er i en vinkel til hinanden (Corynebacterium diphtheria) danner en kæde (miltbrand bacillus). [C.30]

Skelne mellem sin egen (primære) og inducerede (sekundære) fluorescens. I primær fluorescens undersøgte objekt indeholder stoffer (vitaminer, pigmenter og andre metaboliske produkter), talentfuld fluorescerer ved belysning med ultraviolette stråler. De fleste mikroskopi faciliteter ikke ejede sin egen fluorescens, på dette grundlag, når de behandles med fluorescerende mikroskopi farvestoffer (fluorochromer), talentfuld fluorescerer. Som fluorochrom auramin anvendes (Mycobacterium tuberculosis) acridin gul (for gonokokker) korifosfin (for Corynebacterium diphtheria) flyuorestseinizotiotsianat eller FITC (til fremstilling af mærkede antisera), og andre. [C.10]

Volutin-granuler kan genkendes ved hjælp af fluorescerende mikroskopi. Til dette er stoffet farvet med coryphosphin. Gulgrønne kroppe af bakterier med volutin-orange-røde granulater ses på en sort baggrund. Når konventionelle corynebakterier findes, giver de øjeblikkeligt et foreløbigt resultat. Mikrober blev fundet morfologisk svarende til Corynebacteria, og undersøgelsen varer. [C.204]

Fig. 4. Corynebacterium difteri farvet med eddikesyre methyl violet (a) og ifølge Neisser (b)

Gram plet har en alvorlig differentialdiagnostisk værdi og er meget anvendt i mikrobiologi. Ved grampolozhitelyym bakterier omfatter Staphylococcus, Streptococcus, Corynebacterium diphtheria, Mycobacterium tuberculosis og andre. Gram-negativ-gonokokker, meningokokker, E. coli og andre. Nogle typer af bakterier kan farves Gram er variabel afhængigt af alder, fremhæver kultur og andre faktorer. ændre strukturen af ​​cellevæggen. [c.25]

Bakteriologisk Laboratoriet ved BES analyseret for specialiseret bakteriel kontaminering og infektion af patogene og betinget patogene mikroflora miljø objekter luftrum, vand, jord, fødevarer inspektion operere organiserede grupper og enkeltpersoner til transport af patogene tarmbakterier. Corynebacterium diphtheria, pertussis, parakoklyusha, meningokokker. [C.3]

Se også vilkår og artikler:

Pozhozhie rekord

Artiklens indhold1 Hvilket niveau af hæmoglobin anses for lavt? 2 På grund af hvad

UAFHÆNGIGT OG LABORATORIUMARBEJDE

EMNE: FORMÅL FOR FORSKNING AF BACTERIA MORPHOLOGY. MICROSCOPIC FORSKNINGSMETODE.

LISTE OVER KONTROLLSPØRGSMÅL

1. Beskyttelsesudstyr af mikroorganismer. Sporer, stadier og betingelser for spordannelse, biologisk betydning.

2. Kapsler af bakterier, deres betydning.

3. Flagella, deres struktur. Cilia. Sex drak.

4. Komplicerede maleri metoder. Farve teknik til Gram, Zil-Nelsen, Burri-Hins, Neisser.

5. Forskningsmetoder for mikroorganismer i levende tilstand. KOH test. Princippet om metoden.

UAFHÆNGIGT OG LABORATORIUMARBEJDE

Gram-farvningsteknik (angiv hvilke farver bakterierne farves på hvert trin i Gram-metoden / farveskemaet)

De vigtigste morfologiske grupper af bakterier (tegne i form af farvetegninger i overensstemmelse med gramfarvningen):

1► Gramfarvninger fra staphylococcus bouillonkultur, E. coli agar kultur og blandinger deraf. Sketch drugs.

2►Preparation af et difteri bacillus smear, methylenblåt farvning ifølge Leffler og Neisser. Sketch drugs.

3►Installering og registrering af resultaterne af CON-testen med kulturer af Staphylococcus aureus og Escherichia coli.

Resultat KOH-test (med 3% opløsning) Staphylococcus aureus væg er ikke ødelagt, Escherichia coli væg bryder ned og danner sløjfer, der strækker sig bag sløjfen.

DEMONSTRATION

(Angiv metoderne til mikroskopisk farvning og mikroorganismernes morfologi - form og placering i præparatet)

413 Fremstilling af et smear fra agarkultur af sporbærende baciller, farvning ifølge Zil-Nelsen (eller ifølge Ozheshko-metoden), mikroskopi og skitsering.

Farve teknik ifølge Zill-Nelsen (Angiv i hvilke farver bakterierne farves på hvert trin af farvning / farve bordet)

* MT - Mycobacterium tuberculosis; Str-streptokocker.

5► Mikroskopi af mikroorganismer præparater farvet med Ziehl-Nelsen. Sketch drugs.

613 Fremstilling af et smear fra en agarkultur af en stok af rhinosklerom, farvning ifølge Burri-Hins, mikroskopi og skitsering.

7►Prøvning af "knust dråbe" eller "hængende dråbe" præparat fra høje infusion for at studere mobilitet (angiver egenskaberne ved præparationsmikroskopien)

1) Anvendelse af en suspension af mikroorganismer på dækglaset;

2) Smøring af kanterne af hullet på diaset med vaselin og anbringelse af dækglaset på diaset; 3) Det færdige produkt, mikroskopisk med et nedsænkningsmål

Bakterier (gammel græsk βακτήριον - stav) - en gruppe (kongerige) af prokaryote (nukleare) mikroorganismer, oftest enkeltceller. Til dato er omkring ti tusind bakteriearter blevet beskrevet, og det antages, at der er over en million af dem, men selve anvendelsen af ​​begrebet en art til bakterier udgør en række vanskeligheder.

Spirillerne adskiller sig i spiral (corkscrew) cellestruktur og bipolar arrangement af flagella; energi, de får ved at trække vejret. Der er flere genera spirillus. S. volutans - en gigantisk spirillus, som altid kan findes i svin gødning; hun blev berømt gennem opdagelsen af ​​"volutin" (polyphosphater); i ren kultur vokser den kun med en reduceret koncentration på 02 (ca. 5%), og derfor bør den betragtes som mikroaerotolerant. Spirillum minus, det forårsagende middel af Sodoku, er en rottebidssygdom.

Neisser-metoden bruges til at identificere volutinkorn. Smøret er farvet med methylenblåtacetat i 2-3 minutter, under hvilket den kemiske interaktion af farvestoffet og volutin finder sted. Volutinkorn er malet sort. Ved vask med vand bliver cellekroppen misfarvet og derefter i løbet af 1 minut tilsat den gulbrune farve af Vesuvine.

E. coli gram plet

I forlængelse af det mikrobiologiske tema - farve af bakterieceller ved Gram-metoden. Teksten duplicerer kommentarerne i videoen (pludselig er der ingen mulighed for at nogen kan spille videoen, men jeg ønsker at deltage i uddannelsen).

I mikrobiologi anvendes forskellige metoder til farvning af bakterier i vid udstrækning. Selvfølgelig er det muligt at observere uden disse komplekse manipulationer, men så med mikroskopi vil du næsten ikke se noget, fordi brydningsindekset for bakterier ligger tæt på brydningsindekset for væsken, hvori de lever. For at bakterier eller nogle af deres indre eller ydre strukturer skal skille sig klart ud mod baggrunden, anvendes forskellige farvestoffer. I dag ser vi på Grams farvemetode, udviklet i 1884 af den danske læge Hans Christian Gram.

Udførelse af teknikken begynder med fremstilling af et fast smear af en kultur af mikroorganismer. På en glasskinne påføres en dråbe saltvand, i hvilken mikrobiologisk sløjfe, der brændes i brænderflammen, påføres de undersøgte bakterier. Dette kan enten være en øjeblikkelig skrabning eller udtværing eller en dyrkede koloni. Alle trin skal udføres under aseptiske forhold, helst i brænderflammen. Den demonstrerede metode til udførelse af teknikken er udelukkende beregnet til at afspejle indførelsen af ​​de stoffer, der er nødvendige til farvning, og forklare hver scene's rolle.

Kernen i teknikken i den visuelle adskillelse af bakterier i to grupper - gram-positiv og gram-negativ. Den førstnævnte som følge af differentiering fremstår under et mikroskop som farvet i blåt eller lilla, og sidstnævnte i pink. Den væsentligste forskel mellem dem er, at gram-negative bakterier oplever farvestof værre på grund af den mere komplekse struktur af skallen. Især har de en yderligere membran over cellevæggen, som forhindrer indtrængen af ​​uønskede stoffer. I dette tilfælde er peptidoglycanlaget tyndere end de af gram-positive bakterier. Det er disse funktioner, der giver dem mulighed for at vise patogenicitet. Gram-positive bakterier er næppe studeret i medicinsk mikrobiologi, da meget få af dem er i stand til at forårsage sygdomme.

Smøret på glasset tørres i luften eller højt over brænderflammen for at forhindre kogning og protein denaturering, og derefter fastgøres ved at passere gennem flammen i en kort periode. Således dør mikroorganismerne og stikker sikkert til glasset.

Nu er det tid til at lave et farvestof. Først forekommer gentian violet farve. Dette er den primære farve af triphenylmetan serien: en blanding af penta- og hexamethylparaosaniliner med en lille mængde dextrin og fuchsin. Det bruges i medicin ikke kun som et farvestof, men også som et antiseptisk middel. Antimikrobielle egenskaber forklares ved høj permeabilitet gennem bakteriemembraner og virkninger på redoxprocesser.

Farven varer 1-2 minutter, hvorefter gentian violet er drænet og prøverne hældes med Lugol opløsning. Dette stof er efter min mening godt kendt for alle - de bliver behandlet for ondt i halsen med ondt i halsen Lugol opløsning er en forbindelse af jod med kaliumjodid, hvilket giver den god vandopløselighed. Kombination med gentian violet stykker, som trængte ind i bakteriernes cellevægge, danner jod en stærk blå-violet forbindelse. Reaktionen varer også 1-2 minutter.

Nu er tiden kommet for differentiering, det vil sige adskillelsen af ​​gram-positive og gram-negative bakterier. Til dette gøres et glas med slagtilfælde nedsænket flere gange i et kar med 96% ethylalkohol, indtil de faldende dråber er ens i farve med alkoholen i glasset. I denne procedure vaskes det blå-violette kompleks væk fra grammegative bakteriers vægge, der kun forbliver i gummipositive vægge.

For at gramnegative bakterier ikke virker farveløse, vaskes smeden med vand og farves endvidere med en vandig opløsning af fuchsin til den samme magi i 1-2 minutter. Da der allerede er et farvestof i væggen af ​​gram-positive bakterier, er de ikke farvet med fuchsin. Og gram-negative bakterier bliver lyserøde. Smøret vaskes endelig med vand, tørres og præparatet er klar til mikroskopi.

Micra / Lessons / 2. Metoder til undersøgelse af bakteriens morfologi

EMNE: FORMÅL FOR FORSKNING AF BACTERIA MORPHOLOGY. MICROSCOPIC FORSKNINGSMETODE.

LISTE OVER KONTROLLSPØRGSMÅL

Beskyttelsesudstyr af mikroorganismer. Sporer, stadier og betingelser for spordannelse, biologisk betydning.

Kapsler af bakterier, deres betydning.

Flagella, deres struktur. Cilia. Sex drak.

Svære farvestoffer. Farve teknik til Gram, Zil-Nelsen, Burri-Hins, Neisser.

Metoder til undersøgelse af mikroorganismer i levende tilstand. KOH test. Princippet om metoden.

UAFHÆNGIGT OG LABORATORIUMARBEJDE

Gram-farvningsteknik (angiv hvilke farver bakterierne farves på hvert trin i Gram-metoden / farveskemaet)

1. Farvning gentian violet (gentian violet)

(eksponeringstid 1 minut)

2. Behandling Lugol-opløsning

(eksponeringstid 1 minut))

(eksponeringstid 1 minut)

4. Farvning med vandmagenta eller safranin

(eksponeringstid 2 minutter))

De vigtigste morfologiske grupper af bakterier (tegne i form af farvetegninger i overensstemmelse med gramfarvningen):

1► Gramfarvninger fra staphylococcus bouillonkultur, E. coli agar kultur og blandinger deraf. Sketch drugs.

(Staphylococcus aureus, Escherichia coli)

2►Preparation af et difteri bacillus smear, methylenblåt farvning ifølge Leffler og Neisser. Sketch drugs.

farve af leffler

farve af neisser

3►Installering og registrering af resultaterne af CON-testen med kulturer af Staphylococcus aureus og Escherichia coli.

Resultat KOH-test (med 3% opløsning) Staphylococcus aureus væggen falder ikke sammen, Escherichia coli væggen kollapser danner slimede filamenter, der strækker sig bag sløjfen.

Methylenblå af leffler

Sticks uregelmæssigt formet, tilfældigt,

Kokkobakteriya - lidt aflange pinde

Stænger med afrundede ender

Streptobacilli danner en kapsel i kroppen

(Angiv metoderne til mikroskopisk farvning og mikroorganismernes morfologi - form og placering i præparatet)

413 Fremstilling af et smear fra agarkultur af sporbærende baciller, farvning ifølge Zil-Nelsen (eller ifølge Ozheshko-metoden), mikroskopi og skitsering.

Farve teknik ifølge Zill-Nelsen (Angiv i hvilke farver bakterierne farves på hvert trin af farvning / farve bordet)

Farve en tvist om Ozheshko

På et ikke-fast smear sættes 0,5% opløsning af HCI og opvarmes i 1-2 minutter over ramen, vaskes med vand, fast og derefter se nedenfor.

Farverende syrefaste bakterier

1. Behandling Filterpapir er fyldt med et udtværn af Zielyas karbolske fuchsin og opvarmet over en flamme i en åndelampe, indtil dampen adskiller sig.

(eksponeringstid før dampudladning )

Også nødvendigt fjern et stykke papir lægemiddel, skyll med vand

3. Farvning methylenblåt vandig opløsning

(eksponeringstid) 3-5 minutter

* MT - Mycobacterium tuberculosis; Str-streptokocker.

5► Mikroskopi af mikroorganismer præparater farvet med Ziehl-Nelsen. Sketch drugs.

Farve ved Ziehl-Nelsenu.

Mycobacterium tuberculosis in sputum

Farve ved Ziehl-Nelsenu.

613 Fremstilling af et smear fra en agarkultur af en stok af rhinosklerom, farvning ifølge Burri-Hins, mikroskopi og skitsering.

Farve ved ifølge Burri-Hins

7►Prøvning af "knust dråbe" eller "hængende dråbe" præparat fra høje infusion for at studere mobilitet (angiver egenskaberne ved præparationsmikroskopien)

Anvendelse af en suspension af mikroorganismer på dækglaset;

Smøring af kanterne af hullet på diaset med vaselin og anbringelse af dækglaset på diaset; 3) Det færdige produkt, mikroskopisk med et nedsænkningsmål

Bakterier (oldgræsk. βακτήριον - wand) -gruppe (rige)prokaryot(atomfri)mikroorganismer, oftestcellet. Omkring ti tusind er blevet beskrevet hidtil.arterbakterier og det antages, at der er over en million, men selve anvendelsen af ​​begrebet arter til bakterier er forbundet med en række vanskeligheder.

Spirillerne adskiller spiral (korketrukker) cellestruktur og bipolær flagella; energi, de får ved at trække vejret. Der er flere genera spirillus. S. volutans - en gigantisk spirillus, som altid kan findes i svin gødning; hun blev berømt gennem opdagelsen af ​​"volutin" (polyphosphater); i ren kultur vokser den kun ved en reduceret koncentration på 02 (ca. 5%), og derfor bør den betragtes som mikroaerotolerant. Spirillum minus, Sodoku's forårsagende middel, rottebidssygdom.

Neisser-metoden bruges til at identificere volutinkorn. Smøret er farvet med methylenblåtacetat i 2-3 minutter, under hvilket den kemiske interaktion af farvestoffet og volutin finder sted. Volutinkorn er malet sort. Ved vask med vand bliver cellekroppen misfarvet og derefter i løbet af 1 minut tilsat den gulbrune farve af Vesuvine.

Ziehl-Nielsen-metoden er udformet til at differentiere syrefaste bakterier (forårsagende midler af tuberkulose og spedalskhed) fra ikke-sure resistente.

Smøret er farvet med Tsielyas carbolic fuchsin (basisk farvestof), når det opvarmes i 3-5 minutter.

Misfarve med en opløsning af svovlsyre (differentieringsmiddel) i 1-2 minutter.

Mal i 3-5 minutter med methylenblåt (ekstra farvestof).

Cellevæggen af ​​syrebestandige bakterier har et højt indhold af lipider. De er vanskelige at farve, men så bevarer de vigtigste farvestoffer, når de misfarves af syren. Ikke-sure resistente bakterier pletter let og derefter let misfarves med syre og pletter med et yderligere farvestof.

Ozheshko-metoden ligner Ziehl-Nielsen-metoden, men adskiller sig fra brugen af ​​saltsyreopløsning som en mordant, der løsner sporemembranet, hvilket er dårligt følsomt for farvestoffer. Efter farvning med saltsyre, når den opvarmes i 2-3 minutter, smøres det fast og farves i overensstemmelse med Ziehl-Nielsen-metoden. Samtidig bliver cytoplasmaet i cellen blå og sporerne bliver røde.

Burri-Hins-metoden bruges til at plette kapselbakterier og er baseret på, at kapslen ikke opfatter farvestoffer. Kapslen afsløres ved negativ kontrast af Storm-baggrunden. For at gøre dette blandes sort blæk i kultur og tørres. Derefter er de fastgjort i brænderens flamme og farvning af mikrobielle celler ifølge Hins - med vandig fuchsin i 1 minut og vasket med vand i 5-10 sekunder. Som et resultat er en farveløs kapsel og røde kroppe af mikrober tydeligt synlige mod en mørk baggrund.